処理系と最適化オプションによります。
つまり、C言語同士でもどのC言語処理系を使うか、コンパイル時の最適化オプションに何を指定するかによって違うということです。
しかし、ほとんどのプログラムにおいて変数への代入よりも実行性能に影響を与えるそれ以外の要素が多くあるので、そういうものを気にしたほうがよいでしょう。
ほとんどのC言語処理系の場合、ローカル変数に入れれば最適化レベルを上げれば違いはありません。外部変数を使った場合は最適化が止まりますので最適化レベルを上げても少し遅くなります。
CPython処理系の場合は、将来最適化を行うようなことは書かれていますが、現時点では最適化をしていないので遅くなります。
調べたことがないので確実ではありませんが、Pypy処理系は最適化をやっているようですので、性能が変わらないかもしれません。
Unityで使っているC#の場合は最適化オプションがあるので、性能に差は出ないだろうと思います。
HTMLというのがJavaScriptのことなら、そういう最適化はやっていないので遅くなるでしょう。
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